迈安纳INano制备mRNA纳米颗粒方案

所需物品：

1.mRNA

2.mRNA制剂缓冲液

3.注射器

4.15ml锥形管 两个

5.针式过滤器

一、制备mRNA制剂溶液

二、准备工作（芯片初始化）

1.将一个 15 mL 锥形收集管标为“废液”，并在仪器使用过程中的废液收集位置重复使用这个管。

2.将INano仪器插电并开启。仪器正面上方红色 LED 灯应亮起。应将笔记本电脑与仪器连接并启动软件。

3.打开防护罩，将芯片插入芯片位。

4.使用注射器，一个吸入mRNA制剂缓冲液，另一个吸入乙醇。去溶液中的气泡后充有缓冲液的注射器装入左侧，充有乙醇的注射器装入右侧。

5.在INano软件中输入以下值:

a)  体积=2mL

b)  流速比 = 3:1(水相比有机相)

c)  总流速 = 12 mL/min

d)  左侧注射器大小 = 3 mL，右侧注射器大小 = 1 mL

e)  自动开关 = 开启(绿色)

f)  起始废弃物体积 = 0.35 mL，结束废弃物体积 = 0.05 mL

6.将标为“废液”的锥形收集管夹在右侧和左侧的收集管夹具上，关闭盖子。确认窗口中的参数与上述指定值相对应，点击软件中的“开始”按钮，运行程序。

7.电机回归起始位置且下方蓝色 LED 灯熄灭后，打开 盖子，取下锥形收集管。

三、制备mRNA纳米颗粒

1.采用以下参数设置INano软件

a)  体积=2mL

b)  流速比 = 3:1(水相比有机相)

c)  总流速 = 12 mL/min

d)  左侧注射器大小 = 3 mL

e)  右侧注射器大小 = 1 mL

f)  自动开关 = 开启(绿色)

g)  起始废弃物体积 = 0.35 mL，最终废弃物体积 = 0.05 mL

2.将注射器一边吸入水相，一边吸入有机相，去空气并插入芯片的两侧。

3.将一个干净的锥形管放入收集管左侧，废液管放入右侧。

4.点击软件中的开始。

5.运行结束，取下左侧收集管。

四、颗粒表征、稀释和去乙醇

1.将样品稀释。

2.通过动态光散射 (DLS) 测量 mRNA-纳米颗粒的粒径。

3.进行离心过滤。

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